Différenciation des cellules souches embryonnaires humaines en cellules épithéliales respiratoires

• DOI: 10.1016/j.rmr.2015.02.076
• Publication Date: 2015-04-03T19:20:11Z
• Authors: A. Navarre; D. Adam; E. Luczka; P. Birembaut; C. Coraux
• Keywords: Pith

Introduction La mucoviscidose (CF) est la maladie genetique la plus frequente. Les perspectives de therapie pro-regeneratrice, cellulaire et/ou genique sont nombreuses dans la CF. La production in vitro d’epithelium respiratoire non-CF mais surtout CF, en grande quantite, pourrait fournir un modele preclinique humain pour le criblage de molecules therapeutiques. Le but de la presente etude est d’obtenir, a partir de cellules souches embryonnaires humaines (hES), des progeniteurs epitheliaux en preambule a leur differenciation en cellules epitheliales respiratoires. Methodes Les cellules hES (lignee Sahlgrenska 1 [SA-O1]), sont des cellules provenant d’un embryon surnumeraire issu de fecondation in vitro et ne faisant plus l’objet d’un projet parental. Ces cellules sont cultivees sur des cellules nourricieres dont la proliferation est stoppee par un traitement a la mitomycine C (STO) ou sur des substrats tels que le matrigel et la fibronectine plasmatique, dans un milieu commercial optimise pour les cellules epitheliales respiratoires (BEGM) en presence de 0,5 nM de BMP4 et de 0,3 mM d’acide ascorbique (AA) ou retinoique (AR) en continu, ou pendant 3 jours ou 6 jours. La presence de cellules basales progenitrices epitheliales (CK13 positives) a ete examinee par detection immunocytochimique. Resultats Nos resultats montrent par immunocytochimie la presence de cellules CK13 positives des 20 jours de traitement continu AA/BMP4 sur cellules STO. Sur matrigel, nous observons une forte presence de cellules exprimant la CK13 des 30 jours de culture avec 6 jours de traitement AA/BMP4. Ce pourcentage diminue avec 3 jours de traitement AA/BMP4 et s’approche de zero en condition de traitement AR/BMP4. Apres 6 jours de traitement AA/BMP4, la fibronectine plasmatique semble etre un substrat moins efficace que les cellules STO ou le matrigel pour l’induction de la differenciation des cellules CK13 positives. Conclusion Il apparait qu’une stimulation de 6 jours avec la combinaison AA/BMP4 sur matrigel soit suffisante pour induire la differenciation efficace des cellules hES en cellules basales epitheliales. Il apparait egalement que l’AR soit un inducteur moins puissant que l’AA, et que les cellules hES se developpent mieux sur le matrigel que sur la fibronectine plasmatique. Il sera interessant par la suite de discriminer un ou plusieurs marqueurs membranaires permettant d’isoler les cellules d’interet CK13 positives par cytometrie en flux afin de les amplifier specifiquement. Le devenir de ces cellules pourra alors etre evalue in vitro, in vivo ou ex vivo afin de determiner leur capacite a reconstituer un epithelium complet, mature et fonctionnel.