Protocol to evaluate the antiviral effect of FDA-approved drugs against dengue virus in Huh7 cells and AG129 mice

• DOI: 10.1016/j.xpro.2024.102992
• Publication Date: 2024-04-02T16:43:06Z
• Authors: Selvin Noé Palaci...; Jonathan Hernánde...; Carlos Daniel Cor...; Magda Lizbeth Ben...; Luis Adrián De Je...; José Manuel Reyes...; Carlos Noe Farfan...; Juan Fidel Osuna-...; Arely M. Gonzalez...; Raymundo Cruz; Rosa María del Ángel
• Keywords: Alternative medicine; Science (General); Immunology; FOS: Health sciences; Microbiology; Antiviral Agents; Dengue virus; Cell Line; Dengue; Q1-390; Mice; Model Organisms; Virology; Health Sciences; Protocol; Pathology; Animals; Humans; Flow cytometry; Global Impact of Arboviral Diseases; Biology; Pharmacology; Microscopy; United States Food and Drug Administration; FOS: Clinical medicine; Public Health, Environmental and Occupational Health; Antiviral drug; Ebola Virus Research and Outbreaks; Cell Biology; Dengue Virus; Flow Cytometry; Dengue fever; United States; Virus; Infectious Diseases; Protocol (science); Medicine; Drug; Viral Hemorrhagic Fevers and Zoonotic Infections

لا يزال إيجاد علاج فعال ضد الأمراض التي تسببها فيروسات النكهة يمثل تحديًا. هنا، نقدم بروتوكولًا لاختبار الأدوية المعتمدة من إدارة الغذاء والدواء التي تمنع استيراد البروتين النووي المضيف، مما يعزز الحد من عدوى حمى الضنك. نوضح خطوات تحليل تأثير الدواء على تثبيط الاستيراد النووي للبروتينات الخلوية والفيروسية عن طريق المجهر متحد البؤر أو النشف الغربي. ثم نصف إجراءات قياس تأثيرات الأدوية المضادة للفيروسات على الخلايا المصابة بالفيروس عن طريق قياس التدفق الخلوي واختبار فعالية الدواء في فئران AG129 المصابة بحمى الضنك عن طريق فحوصات البقاء على قيد الحياة. للحصول على تفاصيل كاملة حول استخدام وتنفيذ هذا البروتوكول، يرجى الرجوع إلى Palacios - Rapalo et al.1.<br/>Trouver un traitement efficace contre les maladies causées par les flavivirus reste un défi. Ici, nous présentons un protocole pour tester les médicaments approuvés par la Food and Drug Administration qui inhibent l'importation de protéines nucléaires de l'hôte, favorisant une réduction de l'infection par la dengue. Nous décrivons les étapes d'analyse de l'effet du médicament sur l'inhibition de l'importation nucléaire des protéines cellulaires et virales par microscopie confocale ou Western blot. Nous décrivons ensuite des procédures pour mesurer les effets des médicaments antiviraux sur les cellules infectées par le virus par cytométrie de flux et tester l'efficacité des médicaments chez les souris AG129 infectées par la dengue par des tests de survie. Pour plus de détails sur l'utilisation et l'exécution de ce protocole, veuillez vous référer à Palacios-Rápalo et al.1.<br/>Finding an effective therapy against diseases caused by flaviviruses remains a challenge. Here, we present a protocol to test Food and Drug Administration-approved drugs that inhibit host nuclear protein import, promoting a reduction of dengue infection. We describe steps for analyzing the drug effect on nuclear import inhibition of cellular and viral proteins by confocal microscopy or western blotting. We then describe procedures for measuring the antiviral drug effects on virus-infected cells by flow cytometry and testing drug efficacy in dengue-infected AG129 mice by survival assays. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Palacios-Rápalo et al.1.<br/>Encontrar una terapia eficaz contra las enfermedades causadas por flavivirus sigue siendo un desafío. Aquí, presentamos un protocolo para probar medicamentos aprobados por la Administración de Alimentos y Medicamentos que inhiben la importación de proteínas nucleares del huésped, promoviendo una reducción de la infección por dengue. Describimos los pasos para analizar el efecto del fármaco sobre la inhibición de la importación nuclear de proteínas celulares y virales mediante microscopía confocal o transferencia Western. A continuación, describimos los procedimientos para medir los efectos del fármaco antiviral en las células infectadas por virus mediante citometría de flujo y probar la eficacia del fármaco en ratones AG129 infectados por dengue mediante ensayos de supervivencia. Para obtener detalles completos sobre el uso y la ejecución de este protocolo, consulte Palacios-Rápalo et al.1.<br/>