Evaluation of Standard DNAs for Real-time PCR Quantification

• DOI: 10.2965/jswe.34.41
• Publication Date: 2011-02-10T06:05:43Z
• Authors: Masataka AOKI; Nobuo ARAKI; Kazuaki SYUTSUBO; Takashi YAMAGUCHI
• Keywords: 0301 basic medicine; 03 medical and health sciences

Real-time PCR (polymerase chain reaction) 定量でスタンダードDNAとして用いるPCR増幅産物の適合性を，Real-time PCR法により作成した検量線により評価した。同じ遺伝子コピー数におけるThreshold cycle（Ct値）は，メタン生成古細菌のゲノムDNAとその16S rRNA遺伝子を増幅したPCR増幅産物で-0.7～5.6サイクル異なった。この結果は，スタンダードDNAにPCR増幅産物を用いる場合，定量誤差が発生することを示すものである。また，検量線の傾きに基づいたPCR増幅効率（E）は，PCR増幅産物のReal-time PCR定量におけるスタンダードDNAとしての適合性を評価するには不十分であった。